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CRISPR-Cas9-puro Plasmid (linear) Assembly Kit

(CRISPR-Cas9-puro表达载体构建试剂盒)

产品简介:

GenEasyTM CRISPR/Cas9(puro)表达载体构建试剂盒提供了一种构建CRISPR/ Cas9质粒的简单高效的方法,单个质粒可以同时表达sgRNA和Cas9蛋白,并以嘌呤霉素(puromycin)抗性基因作为筛选标记,构建的载体可用于包装慢病毒或直接用于瞬时转染细胞,快速、便捷地实现对目的基因的高效靶向敲除。

 

货号

规格

Cat.No. GZ18001  

10 ∕ 25rxns

 

健康科技

产品特点:

1. 方便快捷:只需一步连接,即可对目的基因进行靶向敲除。

2. 阳性率高:克隆阳性率大于95%。

操作流程:

健康科技

 

 

结果展示:

1.  转化效率高

健康科技

图1

左:热激复苏45分钟后直接取200μL涂板。

右:热激复苏45分钟后2000rpm离心2min,沉淀用200μL的LB培养基重悬后涂板。

*注:转化效率取决于所使用的感受态的效率,如您使用的感受态效果不佳,推荐购买本公司的感受态细胞。

2. 阳性率高

健康科技 

图2

M为DNA ladder 2000 Marker;

1-16为挑取的16个单克隆;

NC为阴性对照。

组分列表:

组分名称

10rxns(μL)

25rxns(μL)

Linearized Cas9-Puro Vector

25

60

10×GB Bufffer I

25

60

10×GB Buffer II

10

25

GB Ligase

10

25

Oligo diluent

500

1500

Control sgRNA insert

25

60

Control sgRNA Primer R

15

30

Screening Primer F

60

150

2×GB DNA Polymerase mix

1000

1500 

注意事项

1. -20℃保存。

2. 本品仅可用于科学研究,不可用于临床治疗。

3. 需自备大肠杆菌感受态细胞和ddH2O。

4. 为了您的安全和健康,请穿戴实验服并佩戴一次性手套操作。

常见问题

1. 转化后没有克隆或克隆数极少?

① 感受态细胞效率不够,请确保所用感受态细胞转化效率在107以上。

② 检查sgRNA Oligo 5’端的碱基序列是否正确,如果不正确是无法与试剂盒中的线性载体连接的。

③ 请严格按照本试剂盒的说明进行操作。

2. 有克隆,但没有或很难检测到预期的阳性克隆?

操作过程中要小心谨慎,避免引入杂菌。

3. 试剂盒中的Cas9-GFP载体有多大?

本试剂盒提供的Cas9-GFP载体大小为9288bp。

4. 需要测序验证sgRNA使用的测序引物序列?

测序引物为hU6-F (5'-GAGGGCCTATTTCCCATGATT-3')

5. 构建好的载体可用来做什么?

使用本试剂盒构建的载体只可用于瞬时转染细胞。

6. 怎么检测设计的sgRNA的切割效率?

推荐使用本公司Geneasy TM CRISPR突变检测试剂盒(Cat.No.GZ18002)评估sgRNA的切割效率。

联系方式:

您可以通过以下方式下单或咨询,我们工作人员会及时与您联系进行沟通反馈:
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