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CRISPR-Cas9-GFP Plasmid (linear) Assembly Kit

CRISPR-Cas9-GFP表达载体构建试剂盒)

 

产品简介:

GenEasyTM CRISPR/Cas9(GFP)表达载体构建试剂盒提供了一种构建CRISPR/Cas9质粒的简单高效的方法,单个质粒可以同时表达sgRNA和Cas9蛋白,并以绿色荧光蛋白(GFP)作为筛选标记,构建的载体可用于瞬时转染细胞,对目的基因进行高效靶向敲除。

 

货号

规格

Cat.No. GZ18003

10 ∕ 25rxns


健康科技
 

产品特点:

1.方便快捷:只需一步连接,即可对目的基因进行靶向敲除。

2.阳性率高:克隆阳性率大于95%。

3.后续应用广:即可用于瞬时转染细胞,也可用于包装慢病毒。

操作流程:


 

结果展示:

健康科技
 

1.   转化效率高

健康科技
图1

左:热激复苏45分钟后直接取200μL涂板。

右:热激复苏45分钟后2000rpm离心2min,沉淀用200μL的LB培养基重悬后涂板。

*注:转化效率取决于所使用的感受态的效率,如您使用的感受态效果不佳,推荐购买本公司的感受态细胞。

2. 阳性率高

健康科技
 图2

M为DNA ladder 2000 Marker;

1-8为挑取的8个单克隆;

NC为阴性对照。

组分列表:

组分名称

10rxns(μL)

25rxns(μL)

Linearized Cas9-GFP Vector

25

60

10×GB Bufffer I

25

60

10×GB Buffer II

10

25

GB Ligase

10

25

Oligo diluent

500

1500

Control sgRNA insert

25

60

Control sgRNA Primer R

15

30

Screening Primer F

60

150

2×GB DNA Polymerase mix

1000

1500 

注意事项:

1. -20℃保存。

2. 本品仅可用于科学研究,不可用于临床治疗。

3、需自备大肠杆菌感受态细胞和ddH2O。

4、为了您的安全和健康,请穿戴实验服并佩戴一次性手套操作。

常见问题:

1.转化后没有克隆或克隆数极少?

① 感受态细胞效率不够,请确保所用感受态细胞转化效率在107以上。

② 检查sgRNA Oligo 5’端的碱基序列是否正确,如果不正确是无法与试剂盒中的线性载体连接的。

③ 请严格按照本试剂盒的说明进行操作。

2.有克隆,但没有或很难检测到预期的阳性克隆?

操作过程中要小心谨慎,避免引入杂菌。

3.试剂盒中的Cas9-GFP载体有多大?

本试剂盒提供的Cas9-GFP载体大小为9288bp。

4.需要测序验证sgRNA使用的测序引物序列?

测序引物为hU6-F (5'-GAGGGCCTATTTCCCATGATT-3')

5.构建好的载体可用来做什么?

使用本试剂盒构建的载体只可用于瞬时转染细胞。

6.怎么检测设计的sgRNA的切割效率?

推荐使用本公司Geneasy TM CRISPR突变检测试剂盒(Cat.No.GZ18002)评估sgRNA的切割效率。

联系方式:

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